?本期AVT與您共同解讀國jia藥監(jiān)局藥品審評(píng)中心發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑滅菌和滅菌工藝研究及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（草案），首先我們給大家分享來自GMP辦公室對(duì)該指導(dǎo)原則發(fā)表的解讀觀點(diǎn)，一起來看下吧！

?分享GMP辦公室發(fā)布《【重磅】剛剛！國jia藥監(jiān)局發(fā)布《注射劑滅菌和滅菌工藝研究及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》！！》，文中觀點(diǎn)總結(jié)如下：

?明確了滅菌工藝選擇的決策樹：注射劑的濕熱滅菌工藝應(yīng)shou選過度殺滅法，即F0（標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間）值大于12的滅菌工藝；對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物，可以選擇殘存概率法，即F0值大于8的滅菌工藝。如果F0值不能達(dá)到8，提示選擇濕熱滅菌工藝不合適，需要考慮無菌生產(chǎn)工藝。

?應(yīng)shou選終端滅菌工藝，任何商業(yè)上的考慮均不能作為不采用具有zui高無菌保證水平的終端滅菌工藝的理由。

?關(guān)于熱降解雜質(zhì)，對(duì)于一般降解雜質(zhì)，不應(yīng)僅僅因?yàn)槠浜砍^ ICHQ3A、Q3B指導(dǎo)原則規(guī)定的限度，就排除濕熱滅菌工藝而不進(jìn)行論證，如果一般降解雜質(zhì)確證為代謝產(chǎn)物或其含量水平已經(jīng)過確認(rèn)在可接受的范圍內(nèi)，仍推薦采用濕熱滅菌工藝。

?也可以采用其他方法降低產(chǎn)品熱不穩(wěn)定性：例如采用充氮工藝或在處方中加入適宜的抗氧化劑來減少氧化雜質(zhì)的產(chǎn)生；選擇利于藥物活性成分穩(wěn)定的pH值范圍、溶劑系統(tǒng)、輔料等；通過滅菌時(shí)間和滅菌溫度的調(diào)整來選擇藥物可以耐受的濕熱滅菌工藝條件等。

?注射劑包裝系統(tǒng)的選擇和設(shè)計(jì)可能影響濕熱滅菌工藝條件選擇和zui終無菌保證水平。研究中需要結(jié)合產(chǎn)品特性、包裝系統(tǒng)的相容性、以及滅菌器的滅菌原理等因素，對(duì)包裝系統(tǒng)的種類、性狀、尺寸進(jìn)行篩選，保證所選的滅菌工藝條件不會(huì)對(duì)包裝系統(tǒng)的密封性和相容性產(chǎn)生不利的影響，如包裝系統(tǒng)的變形、破裂，或者浸出物超過可接受的水平等。應(yīng)該注意的是，使用熱不穩(wěn)定的包裝系統(tǒng)不能作為選擇無菌工藝的理由。

?關(guān)于產(chǎn)品穩(wěn)定性研究，提出穩(wěn)定性研究樣品zui好選取處于最苛刻滅菌條件下的產(chǎn)品，如可選取在熱穿透試驗(yàn)中F0zui大或滅菌參數(shù)值（zui高允許滅菌溫度和/或最長滅菌時(shí)間）zui大位置處的滅菌產(chǎn)品進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確保所有滅菌產(chǎn)品的質(zhì)量在有效期內(nèi)仍能符合要求。

?仿制注射劑滅菌工藝的選擇：仿制注射劑選擇的滅菌/除菌工藝，應(yīng)能保證其無菌保證水平不低于參比制劑。如果參比制劑采用了無菌生產(chǎn)工藝，若仿制注射劑對(duì)其處方組成合理性、滅菌工藝產(chǎn)生的降解雜質(zhì)的安全性風(fēng)險(xiǎn)等因素進(jìn)行了全面的論證之后，也可以采用濕熱滅菌工藝。同時(shí)，參比制劑也需要考慮完善工藝。

?關(guān)于濕熱滅菌裝載熱分布試驗(yàn)：溫度探頭的個(gè)數(shù)和安裝位置應(yīng)綜合滅菌器的幾何形狀、空腔尺寸、產(chǎn)品排列方式以及空載熱分布確認(rèn)的結(jié)果等要素確定，且至少應(yīng)涵蓋空載熱分布測試獲得的高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)，滅菌器自身溫度測試探頭部位等特殊位置。溫度探頭在該階段測試中應(yīng)固定，且安放在待滅菌容器的周圍，注意不能接觸待滅菌容器或非常接近滅菌器內(nèi)壁。

?裝載熱分布試驗(yàn)需要考慮zui大、最小和生產(chǎn)過程中典型裝載量情況，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能使用待滅菌產(chǎn)品。如果采用類似物，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品的熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

?熱穿透試驗(yàn)的溫度探頭的個(gè)數(shù)和采樣位置可參考裝載熱分布設(shè)置，采樣位置的確定應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，包括熱分布試驗(yàn)確定的高溫點(diǎn)和低溫點(diǎn)、其他可能的高溫點(diǎn)、滅菌器溫度探頭附近、產(chǎn)品溫度記錄探頭處等。除要求采用足夠數(shù)量的溫度探頭外，還應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于藥液中最難或最遲達(dá)到滅菌溫度的點(diǎn)，即整個(gè)包裝中最難滅菌的位置。對(duì)于小容量注射液，如果有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭放在產(chǎn)品包裝之外也能夠反映出產(chǎn)品的滅菌程度，風(fēng)險(xiǎn)能夠充分得到控制，也可以考慮將探頭放在容器之外。

?熱分布和熱穿透試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析處理需要關(guān)注的主要參數(shù)：

?·保溫階段每個(gè)探頭所測得溫度的變化范圍

?·保溫階段不同探頭之間測得的溫度差值

?·保溫階段探頭測得的溫度與設(shè)定溫度之間的差值

?·升溫階段探頭測得達(dá)到設(shè)定溫度的最短及最長時(shí)間

?·F0的下限及上限

?·滅菌結(jié)束時(shí)的zui低F0值

?·保溫階段的zui低和zui高壓力

?·飽和蒸汽溫度和壓力之間的關(guān)系

?·保溫階段腔室的zui低和zui高溫度

?·熱穿透溫度探頭之間的zui大溫差或F0的變化范圍

?·最長平衡時(shí)間

?·最少正常運(yùn)行的探頭數(shù)

?熱分布試驗(yàn)的保溫時(shí)間內(nèi)溫度波動(dòng)應(yīng)在±1.0℃之內(nèi)。

?升、降溫過程的溫度波動(dòng)可通過總體F0值來反映，如果溫度或F0值差別過大，提示滅菌器的性能不符合要求、裝載方式選擇不當(dāng)?shù)龋枰獙ふ以虿⑦M(jìn)行改進(jìn)，重新進(jìn)行驗(yàn)證。

?對(duì)于熱敏感的藥物，還應(yīng)該控制滅菌器的升溫和降溫時(shí)間，以保證輸入的熱能控制在合理的范圍內(nèi)，不會(huì)對(duì)產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性造成影響。

?減少驗(yàn)證工作的方法：濕熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)，如存在不同滅菌器（一般指相同工作和設(shè)計(jì)原理的滅菌器）、處方組成、容器規(guī)格、裝量、裝載方式等情況。在不犧牲無菌保證水平的前提下，為減少驗(yàn)證試驗(yàn)數(shù)量，降低驗(yàn)證成本，可綜合各方面因素考慮，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，通過充分的合理性論證，選用具有代表性的滅菌器、待滅菌產(chǎn)品和裝載方式等進(jìn)行滅菌工藝驗(yàn)證，可不必對(duì)所有情況進(jìn)行驗(yàn)證。

?關(guān)于濾器重復(fù)使用時(shí)的驗(yàn)證考慮：過濾器的重復(fù)使用對(duì)于制藥過程來說通常是不被推薦的，如在實(shí)際工作中存在重復(fù)使用的情況，應(yīng)進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，包括細(xì)菌的穿透、過濾器完整性缺陷、可提取物的增加、清洗方法對(duì)產(chǎn)品內(nèi)各組分清洗的適用性、產(chǎn)品存在的殘留（或組分經(jīng)滅菌后的衍生物）對(duì)下一批次產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的影響、過濾器過早堵塞、過濾器組件老化引起的性能改變等，并提供充分的驗(yàn)證和數(shù)據(jù)支持。

?關(guān)于采用減菌過濾工藝時(shí)應(yīng)進(jìn)行的驗(yàn)證：減菌過濾通常設(shè)計(jì)在終端滅菌工藝生產(chǎn)的無菌制劑的灌裝前端，或非最終滅菌工藝生產(chǎn)的無菌制劑的除菌過濾工序前端。通常采用0.45μm或0.22μm（及以下）孔徑的過濾器。針對(duì)減菌過濾應(yīng)進(jìn)行的驗(yàn)證包括化學(xué)兼容性、可提取物/浸出物及吸附試驗(yàn)等。

?給出D值的測定方法

?給出生物指示劑用量的確定方法，包括①陰性分?jǐn)?shù)法②殘存曲線法

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化學(xué)藥品注射劑滅菌/無菌工藝研究及驗(yàn)證指導(dǎo)原則

?目錄

?一、概述

?二、注射劑濕熱滅菌工藝

?（一）濕熱滅菌工藝的研究

?1.濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)

?2.微生物污染的監(jiān)控

?（二）濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證

?1.物理確認(rèn)

?2.生物學(xué)確認(rèn)

?3.基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的驗(yàn)證方案設(shè)計(jì)

?三、注射劑無菌生產(chǎn)工藝

?（一）無菌生產(chǎn)工藝的研究

?1.除菌過濾工藝的研究

?2.無菌分裝工藝的研究

?（二）無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證

?1.除菌過濾工藝驗(yàn)證

?2.無菌工藝模擬試驗(yàn)

?四、附件

?五、參考文獻(xiàn)

?一、概述

?無菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料藥，一般包括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。從嚴(yán)格意義上講，無菌藥品應(yīng)不含任何活的微生物，但由于目前檢驗(yàn)手段的局限性，jue對(duì)無菌的概念不能適用于對(duì)整批產(chǎn)品的無菌性評(píng)價(jià)，因此目前所使用的“無菌”概念，是概率意義上的“無菌”。特定批次藥品的無菌特性只能通過該批藥品中活微生物存在的概率低至某個(gè)可接受的水平，即無菌保證水平（Sterility Assurance Level, SAL）來表征，而這種概率意義上的無菌需通過合理設(shè)計(jì)和全面驗(yàn)證的滅菌/除菌工藝過程、良好的無菌保證體系以及在生產(chǎn)過程中執(zhí)行嚴(yán)格的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）予以保證。

?本指導(dǎo)原則主要參考國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則和標(biāo)準(zhǔn)起草制訂，重點(diǎn)對(duì)注射劑常用的滅菌/無菌工藝，即濕熱滅菌為主的終端滅菌工藝（terminal sterilizing process）和無菌生產(chǎn)工藝（aseptic processing）的研究和驗(yàn)證進(jìn)行闡述，旨在促進(jìn)現(xiàn)階段化學(xué)藥品注射劑的研究和評(píng)價(jià)工作的開展。本指導(dǎo)原則主要適用于無菌注射劑申請(qǐng)上市以及上市后變更等注冊(cè)申報(bào)過程中對(duì)滅菌/無菌工藝進(jìn)行的研究和驗(yàn)證工作，相關(guān)儀器設(shè)備等的驗(yàn)證及常規(guī)再驗(yàn)證不包括在本指導(dǎo)原則的范圍內(nèi)。

?本指導(dǎo)原則的起草是基于對(duì)該問題的當(dāng)前認(rèn)知，隨著相關(guān)法規(guī)的不斷完善以及藥物研究技術(shù)要求的提高，本技術(shù)指南將不斷修訂并完善。

?二、注射劑濕熱滅菌工藝

?（一）濕熱滅菌工藝的研究

?1.濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)

?滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝選擇的決策樹（詳見附件1）進(jìn)行，濕熱滅菌工藝是決策樹中首先考慮的滅菌方法。濕熱滅菌法是利用飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性從而殺滅微生物的方法。

?注射劑的濕熱滅菌工藝應(yīng)shou選過度殺滅法，即F0（標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間）值大于12的滅菌工藝；對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物，可以選擇殘存概率法，即F0值大于8的滅菌工藝。如果F0值不能達(dá)到8，提示選擇濕熱滅菌工藝不合適，需要考慮無菌生產(chǎn)工藝。

?以上兩種濕熱滅菌工藝都可以在實(shí)際生產(chǎn)中使用，具體選擇哪種滅菌工藝，在很大程度上取決于產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性。藥物是否能耐受濕熱滅菌工藝，除了與藥物活性成分的化學(xué)性質(zhì)相關(guān)外，還與制劑的處方、工藝、包裝容器等密切相關(guān)，所以在初期的工藝設(shè)計(jì)過程中需要通過對(duì)藥物熱穩(wěn)定性的綜合分析來確定濕熱滅菌工藝的可行性。

?一般而言，需要通過各個(gè)方面的研究，使藥物盡可能地可以采用濕熱滅菌工藝。只有在理論和實(shí)踐均證明即使采用了各種可行的技術(shù)方法之后，藥物活性成分依然無法耐受濕熱滅菌工藝時(shí)，才能選擇無菌保證水平較低的無菌生產(chǎn)工藝。任何商業(yè)上的考慮均不能作為不采用具有zui高無菌保證水平的終端滅菌工藝的理由。

?1.1藥物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性

?通過對(duì)藥物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以初步判斷藥物活性成分的穩(wěn)定性，如果其結(jié)構(gòu)中含有一些對(duì)熱不穩(wěn)定的化學(xué)基團(tuán)，則提示該藥物活性成分的熱穩(wěn)定性可能較差。在此基礎(chǔ)之上，還應(yīng)該通過設(shè)計(jì)一系列的強(qiáng)制降解試驗(yàn)對(duì)藥物活性成分的穩(wěn)定性做進(jìn)一步研究確認(rèn)，了解在各種條件下可能發(fā)生的降解反應(yīng)，以便在處方工藝研究中采取針對(duì)性的措施，保障產(chǎn)品能夠采用濕熱滅菌工藝。對(duì)于一般降解雜質(zhì)，不應(yīng)僅僅因?yàn)槠浜砍^ ICHQ3A、Q3B指導(dǎo)原則規(guī)定的限度，就排除濕熱滅菌工藝而不進(jìn)行論證，如果一般降解雜質(zhì)確證為代謝產(chǎn)物或其含量水平已經(jīng)過確認(rèn)在可接受的范圍內(nèi)，仍推薦采用濕熱滅菌工藝。

?1.2處方工藝

?在對(duì)藥物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，可以有針對(duì)性地進(jìn)行處方工藝的優(yōu)化研究。例如采用充氮工藝或在處方中加入適宜的抗氧化劑來減少氧化雜質(zhì)的產(chǎn)生；選擇利于藥物活性成分穩(wěn)定的pH值范圍、溶劑系統(tǒng)、輔料等；通過滅菌時(shí)間和滅菌溫度的調(diào)整來選擇藥物可以耐受的濕熱滅菌工藝條件等。

?1.3 包裝系統(tǒng)

?注射劑包裝系統(tǒng)的選擇和設(shè)計(jì)也是可能影響濕熱滅菌工藝條件選擇和最終無菌保證水平的重要因素。研究中需要結(jié)合產(chǎn)品特性、包裝系統(tǒng)的相容性、以及滅菌器的滅菌原理等因素，對(duì)包裝系統(tǒng)的種類、性狀、尺寸進(jìn)行篩選，保證所選的滅菌工藝條件不會(huì)對(duì)包裝系統(tǒng)的密封性和相容性產(chǎn)生不利的影響，如包裝系統(tǒng)的變形、破裂，或者浸出物超過可接受的水平等。應(yīng)該注意的是，使用熱不穩(wěn)定的包裝系統(tǒng)不能作為選擇無菌工藝的理由。

?1.4注射劑的穩(wěn)定性研究

?無論使用何種設(shè)計(jì)方法，都需要進(jìn)行終端滅菌產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究?？疾旖K端滅菌工藝對(duì)產(chǎn)品穩(wěn)定性影響的指標(biāo)可包括有關(guān)物質(zhì)、含量、pH值、顏色以及產(chǎn)品的其它關(guān)鍵質(zhì)量屬性。

?滅菌時(shí)，微生物的殺滅效果和藥物活性成分的降解程度都是溫度和時(shí)間累積作用的結(jié)果。這意味著加熱和冷卻過程的變化也可能影響微生物的殺滅效果和產(chǎn)品的穩(wěn)定性。因此，穩(wěn)定性研究用樣品zui好選取處于最苛刻滅菌條件下的產(chǎn)品，如可選取在熱穿透試驗(yàn)中F0zui大或滅菌參數(shù)值（zui高允許滅菌溫度和/或最長滅菌時(shí)間）zui大位置處的滅菌產(chǎn)品進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確保所有滅菌產(chǎn)品的質(zhì)量在有效期內(nèi)仍能符合要求。

?1.5 仿制注射劑滅菌工藝的選擇

?仿制注射劑選擇的滅菌/除菌工藝，應(yīng)能保證其無菌保證水平不低于參比制劑。如果參比制劑采用了無菌生產(chǎn)工藝，若仿制注射劑對(duì)其處方組成合理性、滅菌工藝產(chǎn)生的降解雜質(zhì)的安全性風(fēng)險(xiǎn)等因素進(jìn)行了全面的論證之后，也可以采用濕熱滅菌工藝。同時(shí)，參比制劑也需要考慮完善工藝。

?2. 微生物污染的監(jiān)控

?過度殺滅法假設(shè)的微生物污染水平和耐熱性都高于實(shí)際值，理論上能完全殺滅微生物，從而能提供很高的無菌保證值，故沒有必要對(duì)每一批次產(chǎn)品進(jìn)行微生物污染水平的監(jiān)控。從控制熱原的角度，建議按照藥品GMP管理，以適當(dāng)?shù)念l次對(duì)微生物污染水平進(jìn)行監(jiān)測。

?與過度殺滅法相比，殘存概率法的熱能較低，為不降低產(chǎn)品的無菌保證水平，除了需要對(duì)滅菌過程本身進(jìn)行嚴(yán)格的控制以外，還需要合理的工藝設(shè)計(jì)來降低微生物污染，并采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)微生物污染水平和耐熱性進(jìn)行監(jiān)測。

?2.1 降低滅菌前微生物污染的工藝設(shè)計(jì)

?在生產(chǎn)工藝各環(huán)節(jié)引入微生物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估基礎(chǔ)上，通?？紤]采用藥液過濾、藥液存放時(shí)限控制等方法來降低注射劑滅菌前的微生物污染。雖然藥液過濾在終端滅菌產(chǎn)品的生產(chǎn)中僅僅作為輔助的控制手段，但是在工藝研究過程中，也應(yīng)該對(duì)濾膜的孔徑、材質(zhì)、使用周期等基本性質(zhì)進(jìn)行必要的篩選和驗(yàn)證，并在工藝操作中進(jìn)行相應(yīng)的規(guī)定。藥液在制備、分裝過程中易引起微生物繁殖，尤其一些營養(yǎng)型的注射劑，因此應(yīng)通過必要的考察和驗(yàn)證來確定藥液配制至過濾前、以及過濾、灌裝后至滅菌前能夠放置的最長時(shí)限，并相應(yīng)確定產(chǎn)品的批量和生產(chǎn)周期。

?2.2 滅菌前微生物污染的監(jiān)測

?滅菌前微生物污染水平監(jiān)測的取樣應(yīng)覆蓋正常生產(chǎn)的整個(gè)過程，應(yīng)選取生產(chǎn)過程中污染zui大，最有代表性的樣品，且要充分考慮到產(chǎn)品從灌封到滅菌前的放置時(shí)間。一般而言，如果灌裝需要持續(xù)一段時(shí)間，可從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)束時(shí)分別取樣。滅菌前微生物污染水平監(jiān)測通常采用薄膜過濾法，方法應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，具體操作可參照《中國藥典》的“微生物限度檢查法”。

?對(duì)于滅菌前微生物污染水平監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)有污染菌的產(chǎn)品，應(yīng)采用合適的方法進(jìn)行污染菌的耐熱性檢查。耐熱性檢查中任何幸存下來或生長的微生物都可以被假定為耐熱菌，一般采用定時(shí)煮沸法將它與已知的生物指示劑的耐熱性加以比較，必要時(shí)，可進(jìn)一步測試耐熱污染菌的D值（微生物耐熱參數(shù)，D值的具體檢測方法詳見附件2），然后根據(jù)滅菌的F0值及污染菌的數(shù)量與耐熱性對(duì)產(chǎn)品的無菌性做出評(píng)價(jià)。當(dāng)產(chǎn)品微生物污染水平超過限度時(shí)，應(yīng)對(duì)污染菌進(jìn)行鑒別，調(diào)查污染菌的來源并采用相應(yīng)的糾正措施。

?（二）濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證

?濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證一般分為物理確認(rèn)和生物學(xué)確認(rèn)兩部分，物理確認(rèn)包括熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)等，生物學(xué)確認(rèn)主要是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。物理確認(rèn)和微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)一致，兩者不能相互替代。

?1.物理確認(rèn)

?1.1 物理確認(rèn)的前提

?物理確認(rèn)所用的溫度測試系統(tǒng)應(yīng)在驗(yàn)證和/或試驗(yàn)前、后進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)的頻次應(yīng)根據(jù)儀器設(shè)備的性能、驗(yàn)證持續(xù)的時(shí)間長短來確定。

?物理確認(rèn)所涉及的滅菌設(shè)備，應(yīng)該在滅菌工藝驗(yàn)證前已通過設(shè)備確認(rèn)。如果在實(shí)施滅菌工藝驗(yàn)證前已經(jīng)在包含擬驗(yàn)證工藝條件下完成了空載熱分布試驗(yàn)，且在驗(yàn)證合格期限內(nèi)，原則上可以引用相關(guān)數(shù)據(jù)和結(jié)論。

?1.2裝載熱分布試驗(yàn)

?裝載熱分布試驗(yàn)的目的是在擬采用的裝載方式下，考察產(chǎn)品裝載區(qū)內(nèi)實(shí)際獲得的滅菌條件與設(shè)計(jì)的滅菌周期工藝參數(shù)的符合性。了解裝載區(qū)內(nèi)的溫度分布狀況，包括高溫點(diǎn)（熱點(diǎn)）、低溫點(diǎn)（冷點(diǎn)）的位置，為后續(xù)的評(píng)估和驗(yàn)證提供科學(xué)依據(jù)。裝載熱分布一般在空載熱分布的基礎(chǔ)上進(jìn)行。溫度探頭的個(gè)數(shù)和安裝位置應(yīng)綜合滅菌器的幾何形狀、空腔尺寸、產(chǎn)品排列方式以及空載熱分布確認(rèn)的結(jié)果等要素確定，且至少應(yīng)涵蓋空載熱分布測試獲得的高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)，滅菌器自身溫度測試探頭部位等特殊位置。溫度探頭在該階段測試中應(yīng)固定，且安放在待滅菌容器的周圍，注意不能接觸待滅菌容器或非常接近滅菌器內(nèi)壁。

?裝載熱分布試驗(yàn)需要考慮zui大、最小和生產(chǎn)過程中典型裝載量情況，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能使用待滅菌產(chǎn)品。如果采用類似物，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品的熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。待滅菌產(chǎn)品的裝載方式和滅菌工藝等各項(xiàng)參數(shù)的設(shè)定應(yīng)與正常生產(chǎn)時(shí)一致，應(yīng)采用適宜的方式（圖表或照片）描述產(chǎn)品的裝載方式，并評(píng)估探頭放置是否合理。每一裝載方式的熱分布試驗(yàn)需要至少連續(xù)進(jìn)行三次。

?1.3 熱穿透試驗(yàn)

?熱穿透試驗(yàn)用于考察滅菌器和滅菌程序?qū)Υ郎缇a(chǎn)品的適用性，目的是確認(rèn)產(chǎn)品內(nèi)部也能達(dá)到預(yù)定的滅菌溫度、滅菌時(shí)間或F0值。一個(gè)好的滅菌器和滅菌程序，既要使所有待滅菌產(chǎn)品達(dá)到一定的F0值，以保障產(chǎn)品的SAL≤10－6，同時(shí)又不能使部分產(chǎn)品受熱過度而造成產(chǎn)品中活性成分的降解，導(dǎo)致同一滅菌批次的產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量不均一。

?熱穿透試驗(yàn)的溫度探頭的個(gè)數(shù)和采樣位置可參考裝載熱分布設(shè)置，采樣位置的確定應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，包括熱分布試驗(yàn)確定的高溫點(diǎn)和低溫點(diǎn)、其他可能的高溫點(diǎn)、滅菌器溫度探頭附近、產(chǎn)品溫度記錄探頭處等。除要求采用足夠數(shù)量的溫度探頭外，還應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于藥液中最難或最遲達(dá)到滅菌溫度的點(diǎn)，即整個(gè)包裝中最難滅菌的位置。對(duì)于小容量注射液，如果有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭放在產(chǎn)品包裝之外也能夠反映出產(chǎn)品的滅菌程度，風(fēng)險(xiǎn)能夠充分得到控制，也可以考慮將探頭放在容器之外。

?熱穿透試驗(yàn)的步驟及要求與裝載熱分布試驗(yàn)基本相同，每一裝載方式的熱穿透試驗(yàn)也需要至少進(jìn)行三次。通過熱穿透試驗(yàn)可以確定在設(shè)定的滅菌程序下，滅菌器內(nèi)各個(gè)位置的待滅菌產(chǎn)品是否能夠到達(dá)設(shè)定的溫度、時(shí)間或F0值。再結(jié)合滅菌前微生物污染水平的檢測，可以確定滅菌器內(nèi)各個(gè)位置的待滅菌產(chǎn)品是否能夠達(dá)到預(yù)期的無菌保證水平。

?對(duì)于F0值zui大點(diǎn)位置的樣品，由于其受熱情況最為強(qiáng)烈，因此應(yīng)評(píng)估該位置產(chǎn)品的穩(wěn)定性情況，以進(jìn)一步確認(rèn)滅菌對(duì)于產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有影響。

?1.4 熱分布和熱穿透試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析處理

?在物理確認(rèn)試驗(yàn)中，應(yīng)確認(rèn)關(guān)鍵和重要的操作參數(shù)并有相應(yīng)的文件和記錄。需要關(guān)注的主要參數(shù)可能包括：

?-保溫階段每個(gè)探頭所測得溫度的變化范圍

?-保溫階段不同探頭之間測得的溫度差值

?-保溫階段探頭測得的溫度與設(shè)定溫度之間的差值

?-升溫階段探頭測得達(dá)到設(shè)定溫度的最短及最長時(shí)間

?-F0的下限及上限

?-滅菌結(jié)束時(shí)的zui低F0值

?-保溫階段的zui低和zui高壓力

?-飽和蒸汽溫度和壓力之間的關(guān)系

?-保溫階段腔室的zui低和zui高溫度

?-熱穿透溫度探頭之間的zui大溫差或F0的變化范圍

?-最長平衡時(shí)間

?-最少正常運(yùn)行的探頭數(shù)

?以上參數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)結(jié)合滅菌條件、滅菌設(shè)備的特點(diǎn)以及產(chǎn)品的實(shí)際情況制定。通常情況下，熱分布試驗(yàn)的保溫時(shí)間內(nèi)溫度波動(dòng)應(yīng)在±1.0℃之內(nèi)。升、降溫過程的溫度波動(dòng)可通過總體F0值來反映，如果溫度或F0值差別過大，提示滅菌器的性能不符合要求、裝載方式選擇不當(dāng)?shù)?，需要尋找原因并進(jìn)行改進(jìn)，重新進(jìn)行驗(yàn)證。另外對(duì)于熱敏感的藥物，還應(yīng)該控制滅菌器的升溫和降溫時(shí)間，以保證輸入的熱能控制在合理的范圍內(nèi)，不會(huì)對(duì)產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性造成影響。

?2.生物學(xué)確認(rèn)

?濕熱滅菌工藝的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是指將一定量已知D值（微生物耐熱參數(shù)）的耐熱芽孢（生物指示劑）在設(shè)定的濕熱滅菌條件下進(jìn)行滅菌，以驗(yàn)證設(shè)定的滅菌工藝是否確實(shí)能使產(chǎn)品達(dá)到預(yù)定的無菌保證水平。生物指示劑被殺滅的程度，是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性的直觀指標(biāo)。

?2.1生物指示劑選用的一般原則

?一般情況下，生物指示劑選擇的原則性要求是：芽孢穩(wěn)定、非致病菌、易于培養(yǎng)、有效期長、保存及使用方便、安全性好。針對(duì)具體的滅菌工藝和具體的產(chǎn)品，還應(yīng)注意所用的生物指示劑的耐熱性應(yīng)強(qiáng)于待滅菌產(chǎn)品中的污染菌。

?濕熱滅菌工藝常用的生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪芽孢桿菌，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌等。對(duì)于采用過度殺滅法的滅菌程序，生物指示劑系統(tǒng)主要是嗜熱脂肪芽孢桿菌的孢子，或其他D值大于1的芽孢。殘存概率法由于其熱輸入量比較低，因此在驗(yàn)證中使用的生物指示劑的耐熱性可以小于嗜熱脂肪芽孢桿菌。

?2.2生物指示劑的使用和放置

?實(shí)際驗(yàn)證過程中可以將生物指示劑接種在待滅菌產(chǎn)品中或直接采用市售的生物指示劑成品，殘存概率法推薦采用直接接種法。由于生物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中的耐熱性會(huì)有所不同，當(dāng)采用將生物指示劑接種到待滅菌產(chǎn)品的方法時(shí)，首先應(yīng)考慮產(chǎn)品對(duì)生物指示劑耐熱性的影響。所以對(duì)于具體的品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產(chǎn)品之中，應(yīng)測定生物指示劑在該產(chǎn)品中的耐熱性，即D值。如果生物指示劑與產(chǎn)品不相容，可以用與產(chǎn)品相似的溶液來代替產(chǎn)品。采用市售的生物指示劑時(shí)，如生產(chǎn)企業(yè)不經(jīng)測試直接使用，應(yīng)能提供相應(yīng)證據(jù)，如供應(yīng)商相應(yīng)的質(zhì)量體系認(rèn)證資質(zhì)、供應(yīng)商質(zhì)量體系的審計(jì)報(bào)告、相應(yīng)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告等，證明生物指示劑的可靠性，以確認(rèn)測試中使用的生物指示劑的D值是準(zhǔn)確的。

?生物指示劑的接種量需要根據(jù)生物指示劑在待滅菌樣品中的耐熱性和滅菌工藝條件來確定，應(yīng)符合挑戰(zhàn)性試驗(yàn)的要求。生物指示劑的接種量可以采用陰性分?jǐn)?shù)法或者殘存曲線法計(jì)算，可以根據(jù)實(shí)際情況（如污染菌的耐熱性，擬用的生物指示劑的D值等）選擇合適的計(jì)算方法。

?裝有生物指示劑的容器應(yīng)緊鄰于裝有測溫探頭的容器，直接接種供試品宜放置在熱穿透試驗(yàn)產(chǎn)品的緊鄰位置，在滅菌設(shè)備的冷點(diǎn)處必需放置生物指示劑。滅菌器的其他部位應(yīng)裝載產(chǎn)品或者類似物，以盡可能的模仿實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的狀況。

?2.3滅菌

?生物指示劑的驗(yàn)證應(yīng)該按照產(chǎn)品設(shè)定的滅菌工藝進(jìn)行滅菌。每個(gè)產(chǎn)品的每個(gè)規(guī)格的每一滅菌程序，至少需要連續(xù)進(jìn)行三次生物指示劑挑戰(zhàn)試驗(yàn)。

?2.4檢查和培養(yǎng)

?可以根據(jù)生物指示劑的生長特性以及驗(yàn)證時(shí)的接種方式，采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢查和培養(yǎng)。完成滅菌后，盡快將挑戰(zhàn)指示劑放入培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。需要注意不同的生物指示劑所需要的培養(yǎng)條件也各不相同，應(yīng)根據(jù)所用生物指示劑的特性和供應(yīng)商的說明書來確定培養(yǎng)條件，同時(shí)應(yīng)放置陽性對(duì)照樣品。

?2.5試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)

?根據(jù)生物指示劑的D值和接種量計(jì)算產(chǎn)品在滅菌過程中實(shí)際達(dá)到的SAL值。如果各次驗(yàn)證的結(jié)果不一致，需要分析原因，采取相應(yīng)的改進(jìn)措施后重新進(jìn)行驗(yàn)證工作。

?3.基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的驗(yàn)證方案設(shè)計(jì)

?濕熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)，如存在不同滅菌器（一般指相同工作和設(shè)計(jì)原理的滅菌器）、處方組成、容器規(guī)格、裝量、裝載方式等情況。在不犧牲無菌保證水平的前提下，為減少驗(yàn)證試驗(yàn)數(shù)量，降低驗(yàn)證成本，可綜合各方面因素考慮，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，通過充分的合理性論證，選用具有代表性的滅菌器、待滅菌產(chǎn)品和裝載方式等進(jìn)行滅菌工藝驗(yàn)證，可不必對(duì)所有情況進(jìn)行驗(yàn)證。

?三、注射劑無菌生產(chǎn)工藝

?注射劑應(yīng)shou選終端滅菌工藝。如經(jīng)充分的研究（包括處方工藝研究、質(zhì)量控制研究等）證實(shí)產(chǎn)品無法耐受終端滅菌工藝，則可考慮能否通過除菌過濾工藝進(jìn)行過濾除菌，如果可以，可采用包含除菌過濾的無菌工藝；如果不可以，則可考慮采用無菌分裝的全無菌工藝。

（一）無菌生產(chǎn)工藝的研究

?1.除菌過濾工藝的研究

?除菌過濾是指采用物理截留的方法去除液體中的微生物，以達(dá)到無菌藥品相關(guān)質(zhì)量要求的過程。采用除菌過濾工藝時(shí)，工藝研究和生產(chǎn)過程控制的重點(diǎn)是影響無菌保證水平的工藝步驟和工藝參數(shù)，主要包括物料（如原料藥、輔料、內(nèi)包裝材料等）的質(zhì)量控制、除菌過濾系統(tǒng)的設(shè)計(jì)及選擇、除菌過濾工藝參數(shù)的研究、除菌過濾生產(chǎn)過程的控制等。

?通常，除菌級(jí)過濾器指在工藝條件下每平方厘米有效過濾面積可以截留≥107CFU（colony forming unit，集落/菌落形成單位）的缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，曾用名：缺陷假單胞菌）的過濾器。除菌過濾工藝通常選用0.22μm（更小孔徑或相同過濾效力）的除菌級(jí)過濾器。

?應(yīng)盡可能采取措施降低除菌過濾的風(fēng)險(xiǎn)，例如：①宜安裝第二只已滅菌的除菌過濾器，最終的除菌過濾濾器應(yīng)當(dāng)盡可能接近灌裝點(diǎn)；②由于微生物通過除菌過濾器的概率隨著待過濾藥液中微生物數(shù)量的增加而增加，最終除菌過濾前，待過濾藥液的微生物負(fù)荷一般小于等于10cfu/100ml；③應(yīng)通過研究確定藥液配制后至過濾前的存放時(shí)間、藥液過濾操作的時(shí)間、過濾后至灌裝前放置的時(shí)間等工藝時(shí)限。

?除菌過濾器的過濾效能是評(píng)價(jià)除菌過濾工藝的重要參數(shù)，需要進(jìn)行相應(yīng)的研究和驗(yàn)證。通常，影響除菌過濾器的除菌過濾效能的因素包括：①藥液的性質(zhì)，如藥液的粘度、表面張力、pH值、滲透壓等；②過濾步驟的工藝參數(shù)，如過濾的壓力、流速、時(shí)間、溫度等；③除菌過濾器與所過濾的藥液的相互作用，如除菌過濾器與藥液的相容性；④除菌過濾器的過濾總量和使用周期等。除菌過濾器的過濾效能可因產(chǎn)品和操作條件不同而不同，濾器的選擇及工藝參數(shù)的研究應(yīng)考慮上述因素。

?2.無菌分裝工藝的研究

?無菌分裝工藝是指滅菌/除菌工藝處理后的原料藥或者原料藥和輔料，用無菌操作的方法分裝到滅菌后的容器中再進(jìn)行密封的生產(chǎn)工藝。無菌分裝工藝的工藝研究和生產(chǎn)過程控制的重點(diǎn)同樣是影響無菌保證水平的工藝步驟，主要包括物料（原料藥、輔料、內(nèi)包裝材料等）的質(zhì)量控制、物料暴露于環(huán)境中可能再污染的操作步驟等。

?關(guān)于物料的質(zhì)量控制，采用無菌分裝工藝的制劑所涉及的所有物料，都必須采用適當(dāng)?shù)臏缇?除菌工藝處理后方可使用。各物料的滅菌/除菌工藝，都應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證、進(jìn)行監(jiān)測，并受到良好的控制。同時(shí)需要對(duì)各物料的無菌性、細(xì)菌內(nèi)毒素水平等進(jìn)行嚴(yán)格控制，通過研究確定相應(yīng)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

?原料藥或者原料藥和輔料的分裝步驟是影響產(chǎn)品質(zhì)量和無菌保證水平的關(guān)鍵生產(chǎn)步驟，應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備和產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行工藝參數(shù)（如分裝速度和分裝時(shí)間等）的研究，并確定相應(yīng)的工藝控制標(biāo)準(zhǔn)。

?（二）無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證

?無菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證主要包括除菌過濾工藝驗(yàn)證及無菌工藝模擬試驗(yàn)。采用除菌過濾工藝的產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行除菌過濾工藝驗(yàn)證及無菌工藝模擬試驗(yàn)，采用無菌分裝工藝的產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行無菌工藝模擬試驗(yàn)。

?1.除菌過濾工藝驗(yàn)證

?除菌過濾工藝驗(yàn)證一般包括細(xì)菌截留試驗(yàn)、化學(xué)兼容性試驗(yàn)、可提取物或浸出物試驗(yàn)、安全性評(píng)估和吸附評(píng)估等內(nèi)容。應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)及實(shí)際過濾工藝中的最差條件，對(duì)相關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)行合理設(shè)計(jì)，具體驗(yàn)證操作（如細(xì)菌截留試驗(yàn)中挑戰(zhàn)用微生物的選擇、濾膜的要求，可提取物和浸出試驗(yàn)中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、提取方式、檢測方法及安全性評(píng)估，化學(xué)兼容性試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)考察的指標(biāo)，吸附試驗(yàn)的試驗(yàn)條件等）可參照《除菌過濾技術(shù)及應(yīng)用指南》及《化學(xué)藥品注射劑生產(chǎn)所用的塑料組件系統(tǒng)相容性研究技術(shù)指南》相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行。其中，結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)，還應(yīng)關(guān)注的內(nèi)容如下：

?1.1 細(xì)菌截留試驗(yàn)中挑戰(zhàn)溶液的選擇

?藥品和/或工藝條件本身可能會(huì)影響挑戰(zhàn)微生物的存活力，因此在進(jìn)行細(xì)菌截留試驗(yàn)之前，需要確認(rèn)挑戰(zhàn)微生物于工藝條件下在藥品中的存活情況（生存性實(shí)驗(yàn)/活度實(shí)驗(yàn)），以確定合理的細(xì)菌挑戰(zhàn)方法。對(duì)于非殺菌性/非抑菌性的藥液，直接在藥液中接種測試微生物是測試除菌級(jí)過濾器細(xì)菌截留能力的shou選方法；對(duì)于抑菌的/殺菌的藥液，可采用修改工藝（如調(diào)整溫度）、修改測試液配方（調(diào)整pH值、去除殺菌成分或使用產(chǎn)品的替代溶液）等方法對(duì)過濾器進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)試驗(yàn)。如果使用替代溶液進(jìn)行試驗(yàn)，需要提供合理的數(shù)據(jù)和解釋。對(duì)于同一族產(chǎn)品，即具有相同組分而不同濃度的產(chǎn)品，可以用挑戰(zhàn)極限濃度的方法進(jìn)行驗(yàn)證，替代性地接受中間的濃度。

?1.2 細(xì)菌截留試驗(yàn)條件的合理性

?過濾溫度、過濾時(shí)間、過濾批量和壓差或流速等會(huì)影響細(xì)菌截留試驗(yàn)的結(jié)果。建議對(duì)實(shí)際生產(chǎn)的過濾工藝進(jìn)行一次徹底評(píng)估，包括溶劑性質(zhì)（例如水性的、酸、堿、有機(jī)的）、過濾時(shí)間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度、過濾批量和過濾器設(shè)計(jì)規(guī)范，以便合理設(shè)計(jì)微生物截留試驗(yàn)條件。如果細(xì)菌截留驗(yàn)證研究中，在過濾器的下游檢測到測試用微生物，則應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。如果調(diào)查確認(rèn)測試用微生物能穿透完整性檢測達(dá)標(biāo)的過濾器，那么就應(yīng)重新考慮此種過濾器在這些工作條件下的適用性。

?1.3 關(guān)于除菌過濾系統(tǒng)的完整性測試

?完整性測試貫穿于細(xì)菌截留試驗(yàn)以及化學(xué)兼容性試驗(yàn)，除此之外，在藥品連續(xù)三批生產(chǎn)工藝驗(yàn)證及常規(guī)生產(chǎn)過程中也涉及完整性測試。應(yīng)明確過濾器使用后完整性測試的潤濕介質(zhì)（包括水、乙醇等標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)或藥液），如果采用的潤濕介質(zhì)為藥液，則應(yīng)進(jìn)行產(chǎn)品相關(guān)完整性標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證以支持該標(biāo)準(zhǔn)的確定。對(duì)于冗余過濾，使用后應(yīng)先對(duì)主過濾器進(jìn)行完整性測試，如果主過濾器完整性測試通過，則冗余過濾器不需要進(jìn)行完整性測試；如果主過濾器完整性測試失敗，則需要對(duì)冗余過濾器進(jìn)行完整性測試。對(duì)于經(jīng)過驗(yàn)證需要一系列（兩個(gè)或以上）的除菌級(jí)過濾器的除菌單元，在使用后必須全部通過完整性測試。

?1.4 關(guān)于濾器重復(fù)使用時(shí)的驗(yàn)證考慮

?過濾器的重復(fù)使用對(duì)于制藥過程來說通常是不被推薦的，如在實(shí)際工作中存在重復(fù)使用的情況，應(yīng)進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，包括細(xì)菌的穿透、過濾器完整性缺陷、可提取物的增加、清洗方法對(duì)產(chǎn)品內(nèi)各組分清洗的適用性、產(chǎn)品存在的殘留（或組分經(jīng)滅菌后的衍生物）對(duì)下一批次產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的影響、過濾器過早堵塞、過濾器組件老化引起的性能改變等，并提供充分的驗(yàn)證和數(shù)據(jù)支持。

?1.5 關(guān)于采用減菌過濾工藝時(shí)應(yīng)進(jìn)行的驗(yàn)證

?減菌過濾通常設(shè)計(jì)在終端滅菌工藝生產(chǎn)的無菌制劑的灌裝前端，或非最終滅菌工藝生產(chǎn)的無菌制劑的除菌過濾工序前端。通常采用0.45μm或0.22μm（及以下）孔徑的過濾器。針對(duì)減菌過濾應(yīng)進(jìn)行的驗(yàn)證包括化學(xué)兼容性、可提取物/浸出物及吸附試驗(yàn)等。

?2.無菌工藝模擬試驗(yàn)

?無菌工藝模擬試驗(yàn)是指采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬制劑生產(chǎn)中無菌操作的全過程，評(píng)價(jià)該工藝無菌保障水平的一系列活動(dòng)。應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)及實(shí)際工藝中的最差條件，對(duì)相關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)行合理設(shè)計(jì)，具體驗(yàn)證操作，包括模擬介質(zhì)的選擇與評(píng)價(jià)（培養(yǎng)基、其他介質(zhì)）、灌裝數(shù)量及容器的裝量、最差條件的選擇、培養(yǎng)方式、結(jié)果評(píng)價(jià)等，可參照《無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌制劑）》相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行。同時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容：

?2.1 最差條件及干預(yù)操作的代表性

?應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品實(shí)際生產(chǎn)工藝，評(píng)估模擬試驗(yàn)設(shè)計(jì)的最差條件及干預(yù)操作是否能夠涵蓋實(shí)際生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生的情況。

?最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。為了確認(rèn)無菌工藝風(fēng)險(xiǎn)控制的有效性，應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)最差條件。包括但不限于以下方面：1）人員：應(yīng)充分考慮人員及其活動(dòng)對(duì)無菌生產(chǎn)工藝帶來的風(fēng)險(xiǎn)。如模擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其他方面污染風(fēng)險(xiǎn)增加時(shí)，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，同時(shí)應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。2）時(shí)限：在條件允許的情況下，適當(dāng)考慮模擬實(shí)際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長時(shí)間及最長的工藝保留時(shí)限等，如設(shè)備設(shè)施、分裝容器、無菌器具滅菌后最長的放置時(shí)間等。3）灌裝速度/分裝速度：模擬試驗(yàn)應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實(shí)際灌裝速度范圍，基于無菌風(fēng)險(xiǎn)的角度分析評(píng)價(jià)灌裝速度對(duì)工藝過程及其他方面的影響程度。例如采用最慢的灌裝速度、zui大的容器用以模擬最長暴露時(shí)間；或采用最快的灌裝速度、最小的容器時(shí)，用以模擬zui大操作強(qiáng)度/難度。4）環(huán)境：無菌工藝模擬試驗(yàn)期間環(huán)境的消毒處理應(yīng)依據(jù)正常生產(chǎn)期間的消毒方法進(jìn)行，避免過度消毒及消毒劑的過度使用。

?干預(yù)是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與無菌工藝生產(chǎn)的所有操作活動(dòng)。干預(yù)可分為固有干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計(jì)劃的無菌操作，如裝載膠塞、環(huán)境監(jiān)控、設(shè)備安裝等；糾正性干預(yù)是指對(duì)無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中更換部件、設(shè)備故障排除等。

?2.2 不同形式注射劑無菌工藝模擬試驗(yàn)

?2.2.1 注射液

?注射液通常采用培養(yǎng)基溶液進(jìn)行常規(guī)的無菌工藝模擬試驗(yàn)。

?2.2.2 注射用凍干粉末

?注射用凍干粉末的無菌工藝模擬試驗(yàn)還包括凍干過程的進(jìn)箱、凍干、出箱操作（冷凍可能會(huì)抑制微生物生長，通常不模擬冷凍過程），通常情況下可采用縮短維持時(shí)間模式，即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞后將容器轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)部分抽真空，維持時(shí)間短于實(shí)際凍干周期，然后箱體破空（可依據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)計(jì)破空次數(shù)）后進(jìn)行壓塞。

?2.2.3 注射用無菌粉末

?注射用無菌粉末其分裝所用的生產(chǎn)線與常規(guī)液體灌裝線不同，進(jìn)行無菌工藝模擬試驗(yàn)時(shí)需要將培養(yǎng)基及模擬介質(zhì)均灌裝入容器中，模擬方法通常包括：使用無菌粉末分裝設(shè)備將液體培養(yǎng)基和模擬介質(zhì)進(jìn)行一步灌裝；加裝特殊設(shè)備灌裝液體培養(yǎng)基；先在線灌裝無菌液體培養(yǎng)基到容器中，然后再在生產(chǎn)線上進(jìn)行無菌粉末的分裝模擬；先在生產(chǎn)線上進(jìn)行無菌粉末的分裝，然后再灌裝無菌液體培養(yǎng)基到容器中；或其他方式。應(yīng)根據(jù)具體情況設(shè)計(jì)培養(yǎng)基灌裝工藝，并充分說明設(shè)計(jì)的合理性。

?四、附件（內(nèi)容略）

?五、參考文獻(xiàn)（內(nèi)容略）